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PROCEDIMIENTO:
2. Cromatografía en Capa Fina
2.A Extracción VER SECUENCIA
Transferir el contenido del tubo a un embudo de decantación. VER FOTOS Extraer con 40 ml de acetato de etilo, por inversión suave, durante 3 minutos. Dejar en reposo hasta que se separen las fases. VER FOTOS Desechar la fase acuosa en el contenedor de orina. Recoger la fase orgánica sobre cápsula de porcelana. Para ello se filtrará a través de un embudo de vidrio provisto de filtro de papel en el que se ha depositado una pequeña cantidad de sulfato sódico anhidro. VER FOTOS Llevar a sequedad en la placa calefactora. Evitar que se reseque el extracto.
VER FOTOS Una vez fría la placa, redisolver el residuo en 500 ?l de acetato de etilo y transferir a un tubo de hemólisis. VER FOTOS
2.B Desarrollo cromatográfico VER SECUENCIA
Aplicar 20-25 µl del extracto en acetato de etilo en las placas para CCF de HTPLC a 1 cm del borde inferior de la placa, con una separación de 1 cm entre las manchas. VER FOTOS Aplicar en la misma placa 10 a 12 µl de patrón de clembuterol de concentración 0.5 mg / ml. VER FOTOS Agregar 10 ml de fase móvil a la cubeta de desarrollo e introducir la placa. Dejar hasta que el frente alcance aproximadamente 9 cm (aproximadamente unos 30 minutos). VER FOTOS
2.C Revelado VER SECUENCIA
Una vez seca la placa, pulverizar en campana con una disolución acuosa de nitrito sódico al 1% en HCl 1M. Secar la placa con aire caliente (por ejemplo con un secador de pelo) hasta que no desprenda olor a HCl. Posteriormente pulverizar con una solución de naftil etilendiamina al 0.4% en metanol. VER FOTOS
En caso positivo, el clembuterol se detectará por la aparición de una mancha de color ROJO - ANARANJADO que debe coincidir en color y Rf con el patrón analizado al mismo tiempo.
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