¿Cómo se calcula el contenido en microorganismos usando una tabla del  NMP?

Tabla del NMP (Tabla I)

Análisis de alimentos, pincha aquí

Conociendo el numero de cultivos (tubos) con acumulación de gas en la prueba de los coliformes, se puede calcular el numero mas probable de coliformes por 100 ml o 100 g de material analizado utilizando la Tabla I.

La Tabla I del NMP se encuentra en Food and Nutrition.

La tabla considera el empleo de 10, 1.0 y 0.1 ml de material analizado. Si se emplean como inóculo otras cantidades, los valores de NMP deducidos de la tabla deben multiplicarse por el número adecuado, para considerar la cantidad real de material introducido en los tubos, así como para obtener el NMP por g (o ml) de material en lugar de por 100 ml (g), que aparece en la tabla. 

¿Cómo se utiliza la tabla del NMP?:  el ejemplo utilizado en la descripción de la tabla utiliza cinco repeticiones de cada dilución.

Consideremos positivos los siguientes cultivos:

 (1) 5 tubos inoculados con 10 ml   de la dilución –1 (1/10) del material : los cinco (5) son postivos

(2) 5 tubos inoculados con 1 ml  de la dilución –1 (1/10) del material: solo uno (1)es positivo

(3) 5 tubos inoculados con 1 ml de la dilucion –2 (1/100) del material: ninguno (0) es positivo

¿Cuánto alimento contiene cada dilución?

Cada uno de los cinco tubos de las tres diluciones representan respectivamente a 1, 0.1 and 0.01 g (ml), del material analizado.

¿Qué posición de la tabla corresponde a la combinación de tubos con crecimento?: Pos=510

La lectura debe realizarse en la “Pos” de la Tabla I correspondiente a la lectura 5-1-0  (corresponde a un NMP de 33) si se hubiesen utilizado 10, 1 and  0.1 g (ml) de material.

¿Cómo se corrige la cantidad de alimento?

Como se usaron cantidades 10 veces menores (1/10) de aquellas con las que se construyó la tabla, el valor de 33 debe multiplicarse por 10, lo que proporciona un valor de 33 x 10 = 330 organismos por 100 g (ml) de material. Como usualmente se expresa por g  (ml) de material, este valor (330) debe dividirse  por 100. El recuento obtenido por el NMP es en este caso de 3,3  organismos por g (ml) de material analizado.

¿Cómo se corrigen las diluciones?

Si se emplean diluciones mayores, se emplea el mismo procedimiento. En tal caso el multiplicador (el factor de dilución) se aumenta para relacionar la cantidad de material realmente inoculado a los valores proporcionados en la Tabla I (para 10, 1.0 and 0.1 g (ml)de material).

Factor de dilución

Es el recíproco de la dilución de material empleada en el análisis. Para calcular el NMP a partir de tres diluciones sucesivas, debe emplearse el factor de la dilución intermedia.

Recomendaciones: selección de las tres diluciones sucesivas ( descritas en la Tabla II en Food and Nutrition)

1-si solo se hacen tres diluciones, emplear los resultados de las tres diluciones para calcular el NMP (ejemplos a y b de Tabla II)

¿Cómo se seleccionan las diluciones?

2- si se hacen más de tres diluciones, emplear solo tres diluciones consecutivas. Seleccionar la mayor dilución (la que contiene menor cantidad de muestra) en la cual  los cinco tubos son positivos y las dos diluciones mayores sucesivas. Ejemplos c y d de lla Tabla II

¿Ninguna dilución proporciona los cinco tubos positivos?

3-si se hacen más de tres diluciones, pero ninguna proporciona los cinco tubos positivos, emplear las tres primeras diluciones. Ejemplo e de la Tabla II

¿Hay tubos positivos en diluciones mayores de las tres seleccionadas?

4-Si existe algún tubo positivo en una dilución mayor de las tres seleccionadas, el número de tales tubos positivos deben añadirse a los de la dilución inferior mas próxima. Ejemplo f de la Tabla II

¿Todos los tubos y diluciones son positivos?

5-si todos los tubos son positivos, se elegirán las tres diluciones mayores y se indicará que el NMP es mayor que (>) el calculado. Ejemplo g  de la Tabla II

6-proporcionar el valor oportuno teniendo en cuenta la Tabla II

7-NMP/100 ml= multiplicar el factor de dilución por el número de microorganismos obtenidos en la Tabla I

Referencias:

HEALTH PRODUCTS AND FOOD BRANCH OTTAWA: ENUMERATION OF COLIFORMS, FAECAL COLIFORMS AND OF E. COLI IN FOODS USING THE MPN METHOD. MFHPB-19 April 2002. Donna Christense, christensend@inspection.gc.ca, Carol Crawford, crawfordc@inspection.gc.ca, Rick SzaboRick_Szabo@hc-sc.gc.ca

U.S. Food & Drug Administration Center for Food Safety & Applied Nutrition. Bacteriological Analytical Manual Online September 2002 Chapter 4 Enumeration of Escherichia coli and the Coliform Bacteria.