METODOS

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

A continuación se detalla la preparación de medios de cultivo líquidos, sólidos y ,de medios de cultivo con componentes de baja solubilidad en agua , o con componentes termolábiles .Finalmente se describe la disposición de los medios de cultivo para su esterilización en autoclave y se indican las condiciones de eliminación del material. Los medios de cultivo sólidos suelen requerir manipulaciones adicionales tras su esterilización. Estas manipulaciones se describen tras la descripción de la esterilización

Medios líquidos

1. Preparación De Medios De Cultivo Líquidos

Se dispone de muchos medios de cultivo deshidratados. Cada fabricante indica el método concreto para su rehidratación . Cuando sea necesaria la preparación del medio de cultivo a partir de cada uno de sus componentes, estos se pesarán por separado. Se disolverán sucesivamente en el volumen adecuado de agua destilada. Finalmente se ajustará el pH (cuando el medio de cultivo incorpora un indicador de pH su color se utilizará para el ajuste).

Dosificar en tubos o matraces video

2-Tapar

Tapar los recipientes con algodón graso o el material recomendado video video

3-El medio de cultivo está preparado para su esterilización

Los tubos se depositarán en gradillas o en cestillos evitando que se mojen los tapones

Preparar los matraces para esterilización por calor en autoclave

Medios sólidos

2. Preparación De Medios De Cultivo Sólidos

Para la preparación de medios de cultivos sólidos se añade Agar-Agar a la solución nutritiva preparada en agua como en los medios líquidos. Se suspende por agitación y se funde por calentamiento. Se deja enfriar en un baño mantenido a 50-60 ^oC. Se dosifican en estado líquido y se tapan los recipientes que los contienen.

Medios con componentes termolábiles

3. Preparación De Medios De Cultivo Con Componentes Termolábiles Los requerimientos nutricionales especiales de muchas bacterias son sustancias termolábiles. Como la forma usual de esterilización es el calor, tales sustancias deben esterilizarse por separado. Sus soluciones estériles se añaden al resto de componentes del medio de cultivo, una vez esterilizados. Para ello las sustancias termolábiles del medio se solubilizan en un pequeño volumen de agua y se estirilizan por filtración. El resto de componentes se disuelven en un volumen de agua suficiente para que al mezclar con la solución estéril del componente termolábil se restablezca el volumen final adecuado.

Medios con componentes de escasa solubilidad en agua

4. Preparacion De Medios De Cultivo Con Componentes De Baja Solubilidad En Agua

En algunas circunstancias es necesario incorporar a los medios de cultivo componentes de escasa solubilidad en agua. En estos casos es necesario emplear disolventes orgánicos. Estos disolventes orgánicos son tóxicos. Los disolventes deben ser diluidos suficientemente antes de su incorporación, o eliminados del medio de cultivo antes de ser inoculados. Un ejemplo puede encontrarse en la práctica aplicada de Suelos contaminados por hidrocaruros

Eliminación de materiales

Disposición de los medios de cultivo para su esterilización en autoclave y manipulación frecuente de los medios de cultivo sólidos esterilizados

Los cultivos una vez utilizados se esterilizan en autoclave. Los residuos líquidos se recogen en los contenedores dispuestos al efecto por la UGR