MICROSCOPÍA |
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1. INTRODUCCIÓN |
Las células bacterianas no se pueden observar a simple vista, sino tan solo la consecuencia de su crecimiento y división, es decir, un cultivo de bacterias. |
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| Si el cultivo se ha realizado en un medio líquido podremos apreciar turbidez y coloración si la tuviese,. Si el cultivo se ha realizado en un medio sólido una especie de tapiz y sí se ha seguido una técnica denominada aislamiento, colonias bacterianas. No obstante, si queremos visualizar las bacterias que originan la turbidez de un medio líquido o dan lugar a una colonia, tendremos que recurrir a la MICROSCOPIA. |
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| 1. El microscopio óptico compuesto |
El microscopio común es del tipo compuesto de campo claro; el campo observado se ve iluminado y los objetos aparecen más oscuros que el fondo. |
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| La dirección que se indica enseña (en castellano) a utilizar el microscopio |
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Sistema de iluminación |
Posee una fuente luminosa. La luz es recogida sobre la preparación, por un condensador. la unidad condensadora posee un diafragma que puede abrirse o cerrarse para variar la cantidad de luz y la lente, que concentra la luz. |
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| Diafragma |
El diafragma se utiliza, generalmente abierto cuando se observan las preparaciones con objetivo de inmersión (su apertura depende de la densidad y contraste del material examinado) |
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| Condensador |
). A su vez el sistema condensador puede utilizarse a diferentes distancias respecto a la fuente luminosa, dependiendo de que se estén observando preparaciones teñidas (condensador alto) o en fresco (condensador bajo). |
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Lentes de amplificación |
Consta de lentes oculares y lentes objetivo. Las lentes objetivo (débil seco, fuerte seco y de inmersión), están montadas sobre una pieza llamada revólver . |
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| Objetivo |
aumento de objetivo |
Aumento de ocular |
Amplificación |
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| Seco Débil |
X10 |
X10 |
100 |
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| Seco fuerte |
X40 |
X10 |
400 |
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| Inmersión |
X100 |
X10 |
1.000 |
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| La amplificación total resulta de multiplicar la amplificación que proporcione el objetivo y el ocular. En bacteriología se suele usar mas frecuentemente el objetivo de inmersión, con lo cual la amplificación total será de 1000 aumentos. |
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| Aceite de inmersión |
Para la utilización del objetivo de inmersión las preparaciones han de cubrirse con una gota de aceite de inmersión, en la cual se sumerge el objetivo. |
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| El modo de obtener imágenes nítidas con el objetivo de inmersión es introduciéndolo en un medio con un índice de refracción mayor que el del aire y semejante al del vidrio. Para ello se utiliza el aceite de inmersión. |
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En agua es visible la porción de la varilla de vidrio sumergida (izquierda). En aceite de inmersión no es visible. |
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Sistema de enfoque |
Consta de un tornillo macrométrico y de otro micrométrico (para el enfoque definitivo). |
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2. Preparaciones para el examen al microscopio óptico |
Existen dos tipos generales de preparaciones para la observación al microscopio óptico: preparaciones “en fresco” y preparaciones teñidas (tinciones). |
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| Preparaciones en fresco |
Las suspensiones de bacterias se observan entre el portaobjetos y cubreobjetos ("entre porta y cubre"). Solo se utilizan con finalidades muy concretas (por ejemplo para detectar la movilidad bacteriana). |
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| Tinciones |
Las tinciones incluyen el tratamiento de las células con colorantes que se unen a las células aumentando el contraste con el medio externo. |
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| Fijación |
En general es necesario que las células se unan (fijen) al portaobjetos antes de la tinción. El método más frecuente es fijación al calor. Ciertas tinciones usan fijadores mas suaves, como el glutaraldehído o ácido tánico |
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| Colorantes
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Los colorantes son sales con un ion coloreado. Pueden ser catiónicos o aniónicos. Cuando el ión coloreado es el catión se denominan colorantes básicos o catiónicos. Tiñen estructuras que poseen cargas negativas; en este grupo se incluyen la mayoría de los colorantes mas comunes (azul de metileno, cristal violeta, safranina, fuchina, etc). |
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| Cuando el ion coloreado es el anión se denominan colorantes ácidos o aniónicos (por ejemplo la eosina). Tiñen estructuras cargadas positivamente. |
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| Algunos colorantes(como la tinta china) no poseen carga y suelen utilizarse para realizar tinciones negativas.como la observación de cápsulas |
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3. Tipos de tinciones |
Tinción simple o sencilla: Utiliza un solo colorante. Proporciona información sobre la morfología, agrupación y tamaño celular. |
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| Tinción diferencia]: Utiliza más de un colorante y permite separar las bacterias en grupos de acuerdo a su comportamiento tintorial. Ej. : Tinción de Gram; o la de ácido-alcohol resistencia( Tinción de Kinyoun o la de Ziehl-Neelsen). |
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| Tinción estructural Tiñe selectivamente ciertas estructuras o formas celulares. Ej. : Tinción de esporas; Tinción de cápsulas (Método de Anthony). |
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| Tinción negativa: Utiliza colorantes que tiñen el fondo, resaltando las células que quedan sin color |
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| Existen además tinciones específicas para depósitos intracelulares de PHB, glucógeno o polifosfato. Se les denomina, a veces, pruebas microquímicas |
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