Infecciones por M .pneumoniae |
El síndrome clínico mas común (mas del 70% de las infecciones) por M. pneumoniae es una traqueobronquitis. Menos del 50 % de las personas infectadas desarrollan una neumonía que no suele ser grave, pero que es de larga duración (neumonía atípica primaria, o ambulatoria). |
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Diagnóstico |
DIAGÓSTICO DE INFECCIONES POR Mycoplasma pneumoniae (Kit SERODIA_MYCOIIR de FUJIREBIO INC.) Fundamento del Kit SERODIA_MYCOIIR Utiliza partículas coloreadas de gelatina sensibilizadas con componentes de la membrana de M. pneumoniae Mac. Si un suero humano contiene anticuerpos (Acs) frente a la bacteria (diagnóstico indirecto), las partículas sensibilizadas aglutinan. Es necesario agotar por dilución el suero para poder determinar el punto final de aglutinación. |
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Muestras de suero y reactivos |
Las muestras de suero deben estar exentas de eritrocitos, de cualquier componente visible . La mezcla de las partículas sensibilizadas y no sensibilizadas se hará vigorosamente. |
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Metodo cuantitativo |
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Preparación del reactivo: |
1- Reconstituir las partículas sensibilizadas |
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A la izquierda se muestra un esquema de la placa de “microtitter” utilizada. Las coordenadas sirven para identificar el contenido de cada pocillo y el resultado final. En las columnas 1-10 se colocan diez sueros diferentes. La columna 12 sirve de control positivo de los reactivos. La línea B sirve de control negativo para indicar que no existe aglutinación inespecífica en los sueros |
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Añadir diluyente |
1. Línea A: añadir diluyente del suero (100 μl en pocillo 1 y 25 μl en los pocillos del 2 al 8) |
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Añadir sueros |
2-Línea B: añadir 25 μl de suero problema 1 en el pocillo 1 (repetir la operación para cada muestra de suero (columnas 2 a la 10; el resultado que se muestra mas abajo corresponde a las columnas 1 a 10 ) |
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Diluir los sueros |
3-preparar diluciones duplicadas seriadas desde las líneas B a la F para cada suero (columna) |
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Partículas no sensibilizadas |
4- Línea B: añadir 25 μl de partículas no sensibilizadas |
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Partículas sensibilizadas |
5-Líneas C a F: añadir 25 μl de partículas sensibilizadas |
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Homogeneizar |
6-Cubrir con “parafilm “. Agitar suavemente utilizando una bandeja de agitación. |
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Negativo: las partículas se acumulan en el centro |
7-Dejar en reposo durante 3 horas. Leer el patrón de aglutinación (el mismo resultado puede verse tras incubación durante una noche). Determinar la máxima dilución de suero que proporciona aglutinación.
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Positivo o Muy positivo: las partículas cubren completamente el fondo con aglutinación uniforme |
Expresión de los resultados |
El título de anticuerpos se expresa como el recíproco de la mayor dilución que proporciona aglutinación. |