Detección de bacterias de significado especial en alimentos: Salmonella
Fundamento
El método comprende la suspensión de una alícuota del alimento en agua de peptona (acondicionamiento), el enriquecimiento en caldo selenito-cistina, detección de Salmonella en medio de Hektoen y la comprobación de que la bacteria (Salmonella) es ureasa negativa
Método
1-Acondicionamiento de la muestra (revivificacion o preenriquecimiento) en agua de peptona tamponada. Homogeneizar 25 g de alimento en 225 ml de agua de peptona tamponada.
Incubar a 37 º C 2-3 horas
Enriquecimiento:
2- inocular con 1 ml de la muestra enriquecida un tubo con 10ml de un caldo selectivo para Salmonella ( selenito-cistina o
Caldo selenito-cistina
El selenito inhibe el crecimiento de las bacterias coliformes y de los enterococos durante las primeras 6-12 horas de incubación. Esta inhibición disminuye rprogresivamente con el tiempo. Salmonella, Proteus y Pseudomonas solo se inhiben ligeramente
Aislamiento:
3- Aislar en medio solido selectivo (agar Hektoen
) a partir de cada tubo de enriquecimiento, por siembra en estrias Incubar a 37 º C durante 24 horas
Medio de Hektoen
Es selectivo (por su contenido en sales biliares) para el cultivo de enterobacterias. Tiene la ventaja sobre otros que permite el crecimiento de Salmonella y Shigella pero inhibe suficientemente otras bacterias no entericas acompañantes. Por ello su uso se recomienda para cultivo de bacterias patógenas intestinales a partir de heces o alimentos. Es tan selectivo, que no se esteriliza tras la disolución de sus componentes.
Contiene tres fuentes de carbono fermentables: sacarosa, lactosa y salicina y dos indicadores acido-base (azul de bromotimol y fuchina). Las bacterias que fermentan la lactosa, como las coliformes dan colonias rosa-asalmonado o incluso amarillo. Las que no la fermentan dan colonias verdes o verde azuladas.
La producción de SH2 se detecta como S2Fe3 con citrato ferrico . Shigella fermenta la lactosa (colonias asalmonadas) pero Salmonella, no fermenta la lactosa por lo que sus colonias son de color verde, con un precipitado negro (por producción de sulfidrico). Este medio no diferencia a Proteus de Salmonella por lo que a las bacterias sospechosas se le realizará la prueba de la ureasa (Proteus +), que es negativa para Salmonella
4-Detectar colonias de Salmonella (negras verdes o verde-azuladas. Deben diferenciarse de Proteus con la prueba de la ureasa)
Prueba de la ureasa
EL medio “Urea Agar” de Christensen contiene rojo fenol y a pH 6.8 es amarillento. Las ureasas liberan amoniaco y CO2 de la urea. El amoniaco liberado alcaliniza el medio, el cual toma un color rosado (en la imagen : Proteus alcaliniza el cultivo, es ureasa +).
