Recuentos de microorganismos en alimentos

3-2-1-Recuentos en placa  de hongos, mesófilos totales y enterobacterias

Se obtienen varias diluciones del alimento. Se inoculan 0,1 ml de cada dilución en el medio de cultivo adecuado, se incuban y se determina el número de células viables de tres tipos de organismos por el número de colonias observadas (número de unidades formadoras de colonias (, UFCs).

Se describe el recuento de hongos (filamentosos y levaduras), microorganismos mesofilos y enterobacterias. El procedimiento se diferencia en el medio de cultivo y condiciones de incubación (temperatura y tiempo).

Expresión de los resultados

El contenido en microorganismos por gramo de alimento se obtiene de multiplicar el número de UFCs obtenido en una dilución, por su factor de dilución y por 10 (para considerar 1 ml de la dilución de la que se inocularon 0, 1 ml):

Inoculación de los medios de cultivo

1-Preparar tres placas de cada medio de cultivo para cada dilución (de la 10^-2 a 10^-4) de alimento

            2- Depositar en cada placa 0,1 ml de la dilución correspondiente.

            3- Distribuir uniformemente sobre la superficie del medio de cultivo con espátula de Drigalski

            4- Incubar a la temperatura y tiempos indicados

            5- Determinar el número de unidades formadoras de colonias por gramo de alimento contando las placas que contengan de 30 a 300 colonias

Recuento de hongos: fundamento

El medio de cultivo de  Saboureaud-cloranfenicol permite el crecimiento de hongos por su contenido relativamente elevado en azúcares. Su pH ácido y el cloranfenicol inhibe el crecimiento de bacterias. El sobrecrecimiento de los hongos filamentosos imposibilita un recuento adecuado (imagen de la izquierda). La imagen de la derecha  muestra colonias fúngicas contables sobre este medio de cultivo.

Recuento de microorganismos mesófilos totales: fundamento

El crecimiento sobre un medio rico permite detectar mayor cantidad de microorgnanismos. En este caso se utiliza TSA (“Tryptic Soy Agar”). Ambas imágenes muestran colonias crecidas obre TSA

Recuento de enterobacterias: fundamento

La presencia de enterobacterias en un alimento se interpreta consecuencia del contacto con contenido fecal animal. Por ello se utiliza a estas bacterias como indicadoras de contaminación fecal del alimento. Para análisis de alimentos se utiliza el medio VRBG. El medio VRBG contiene glucosa como sustrato de fermentación, rojo neutro como indicador ácido-base y cristal violeta y sales biliares que inhiben el crecimiento de bacterias diferentes a las enterobacterias. Las enterobacterias fermentan la glucosa (el indicador aparece de color rosa) y sus colonias son rojas rodeadas de un precipitado rosa de ácidos biliares. La imagen muestra colonias bacterianas sobre VRBG. Sin embargo no es absolutamente específico porque otras bacterias, como Aeromonas dan colonias de aspecto semejante.  Las colonias sospechosas de corresponder a enterobacteriaceas deben confirmarse con otras pruebas,