METODOS |
Tinciones |
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Tinción de esporas (técnica de Shaeffer-Ffulton) |
Estructura y formación de las endosporas están descritas en este curso Encontrará información más completa sobre las endosporas bacterianas en los apuntes on line del Profesor E. Iañez |
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| Fundamento: envuelta |
La envuelta de la endospora es mas compleja e impermeable que la envuelta de las células vegetativas en las que se forma. Solo se puede teñir el contenido de la espora alterando su envuelta. La impermeabilidad de las cubiertas dificulta que las endosporas se decoloren una vez teñidas. |
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| Verde de malaquita | El verde de malaquita es un colorante débilmente básico (tiene una carga positiva débil) y por tanto, se une débilmente a la bacteria. Penetra en las células vegetativa . Cuando se calienta la preparación también penetra las endosporas. | ||
| Decoloración | Durante el lavado con agua, el verde de malaquita se elimina de las células vegetativas, pero no de la endospora. |
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| Safranina | El colorante de contraste (la safranina) solo puede teñir a las células vegetativas (decoloradas por el agua) | ||
| Material necesario | Cultivos de Bacillus subtilis y de Bacillus megaterium. Verde malaquita al 5 % en agua y Safranina al 1% en agua. Platina de Koch. | ||
| Método de la tinción de endosporas | Cubrir la extensión con papel de filtro (dificulta la precipitación del colorante sobre las bacterias) |  |
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 verde de malaquita |
Depositar la preparación sobre una platina de Koch. Añadir verde de malaquita. Esperar un minuto Vídeo. | ||
  calor |
Seguir la tinción con calor : en emisión de vapores durante 5-10 minutos. Vídeo .Dejar enfriar. | ||
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Lavar con agua abundante. Secar | ||
 safranina |
Teñir con safranina (dos minutos). Lavar con agua. Secar. Observar con objetivo de inmersión. |  |
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| Resultado | |||
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Esporas teñidas de verde y células vegetativas teñidas de rosa. Observar la forma, tamaño relativo y posición de la espora en la célula vegetativa. |
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lavar