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Determinación de Estricnina en muestras de higado


 Introducción


 Fundamento


 Metódica
 

    Reactivos y Material
 

    Procedimiento
 

    Video Completo


 Cuestiones y Cálculos
PROCEDIMIENTO:

A. Preparación de la muestra

  1. Triturar la pieza de hígado en la picadora.

  2. Pesar 1 g de hígado triturado en el tubo de vidrio de 25 ml de tapón de rosca. Agregar 3 ml de SO4H2 0.1N y mezclar bien con una varilla de vidrio.   VER FOTOS

  3. Ajustar el pH a 10 (aprox.) con NaOH 6N. Para ello se empleará una pipeta Pasteur agregando unas gotas al tubo de vidrio. Se comprobará el pH por medio de la varilla de vidrio sobre pequeños trozos de 1 cm (aprox.) de tira indicadora de pH.   VER FOTOS --  VER SECUENCIA


B. Extracción con cloroformo

  1. Añadir al tubo 20 ml de cloroformo y extraer mediante agitación suave (inversión) durante 2-3 minutos.   VER FOTOS --  VER SECUENCIA

  2. Centrifugar a 1500 rpm / 5 min.   VER FOTOS --  VER SECUENCIA

  3. Verter todo el contenido (fase acuosa + fase orgánica) sobre un filtro con una pequeña cantidad de SO4Na2 anhidro recogiendo el filtrado en una cápsula de porcelana.   VER FOTOS --  VER SECUENCIA

  4. Llevar a sequedad en la placa calefactora, evitando que se reseque el extracto.   VER FOTOS

  5. Una vez fría la placa, redisolver el residuo en 500 µl de cloroformo y transferir a un tubo de hemólisis.   VER FOTOS


C. Análisis

  C.I. Prueba directa   VER SECUENCIA

  1. Colocar 10 µl del extracto sobre un vidrio de reloj. Dejar evaporar el disolvente. Agregar una gota del reactivo de Mandelin y anotar el cambio de color en la muestra. Se da como positivo un color violeta.   VER FOTOS


  C.II. Cromatografía en capa fina   VER SECUENCIA

  1. Evaporar 50 µl del extracto clorofórmico sobre un disco A de TOXI-LAB® previamente colocado en una cápsula de aluminio en el bloque térmico (en campana). Una vez evaporado, colocarlo en la placa A (Toxi-Gram A).   VER FOTOS

  2. Desarrollo. Agregar 10 ml de fase móvil a la cubeta de desarrollo y 60 µl de amoniaco concentrado. Introducir la placa en la cubeta de desarrollo y dejar que el frente alcance el nivel 9.50 (aproximadamente 15 minutos).   VER FOTOS

  3. Revelado. Una vez seca la placa, introducir en la solución de revelado (SO4H2 concentrado). La estricnina se detectará por la aparición de una mancha de color violeta intenso. Tanto el color de la mancha en la calle del problema como el Rf debe coincidir con el patrón establecido por el sistema.   VER FOTOS
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