3. Prueba O-F, Oxido fermentativa o de Hugh-Leifson. |
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3.1. Fundamento |
Es una prueba que indica del tipo de metabolismo energético: respiratorio (O) o fermentador (F). Se suele utilizar glucosa como sustrato. Se detecta la acumulación de ácidos con un indicador ácido-base (azul de bromotimol). La bacteria se inocula con el hilo recto (por picadura ) y se incuba en condiciones de aerobiosis (sin parafina) y de anaerobiosis (con parafina, tubo cerrado), simultáneamente. Las bacterias que respiran aerobiamente crecen en la superficie del medio del tubo abierto. Transforman la glucosa en CO2, la superficie del medio se verá ligeramente amarilla (por la formación de ácido carbónico originado al reaccionar el CO2 con el agua del medio). En el tubo cerrado el cultivo se mantiene azul-verdoso. Las bacterias fermentadoras producen ácidos a partir de la glucosa. Viran el cultivo del tubo cerrado a amarillo; en el tubo abierto se inicia el viraje en el fondo, pero transcurridas 24 horas los ácidos pueden difundir por todo el medio virándolo a amarillo. |
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Materiales y reactivos |
Parafina estéril y Medio de Hugh-Leifson con glucosa(1% ) |
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Método |
Eliminar el oxígeno del medio (“regenerar”) de dos tubos para cada bacteria (calentar a 100 oC a baño maria durante 10 minutos y enfriar rapidamente). |
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| Inocular por picadura (con hilo de siembra) dos tubos por cada bacteria. |
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| Añadir a uno de los cultivos parafina estéril para aislarlo del aire. Incubar a 37 oC durante 24 horas |
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Resultados |
Determinar cual de los cultivos ha producido ácidos (en su caso). Volver a incubar otras 24 horas. Determinar de nuevo la producción de ácidos. |
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| Produce ácidos por: |
TUBO ABIERTO (O) |
TUBO CERRADO (F) |
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| Respiración |
Ligeramente amarillo en superficie |
Verde |
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| Fermentación |
Amarillo |
Amarillo |
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| No produce ácidos |
Verdeo o azulado |
Verde o azulado |
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La figura de la izquierda muestra el cultivo de tres bacterias: dos fermentadoras (izquierda y centro) y otra no fermentadora (derecha). |
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4. Fermentación de azúcares |
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Fundamento |
Se determina si la bacteria es capaz de fermentar un carbohidrato particular (produccón de ácidos acompañados o no de gases). Se aplica a bacterias con metabolismo fermentador, ensayándose por separado diferentes carbohidratos. La producción de ácidos se pone de manifiesto con un indicador ácido-base (púrpura de bromocresol) y la de gases con una campanita Durham (tubo cerrado por uno de sus extremos que se coloca invertido en medio de cultivo). |
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Materiales y reactivos |
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Método* |
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Suspender el inóculo en el medio de cultivo. Agitar. Incubar a 37 oC durante 24 horas. (Lecturas tardías pueden dar resultados equívocos). |
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Resultado: |
Viraje del indicador: indica producción de ácidos. Presencia de burbujas en la campanita Durham, producción de gases |
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El cultivo de la izquierda muestra la producción de ácidos sin gases y el de la derecha la producción de ácidos y de gases. |
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| *Para inocular un medio líquido con cultivos sobre medio sólido tomar una pequeña cantidad de bacterias y suspenderlas en el líquido. Agitar sin mojar los tapones. Pasar a la practica de siembra: aislamiento |
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