6. Prueba de la reducción de nitratos y nitritos

Fundamento

En esta prueba se detecta una respiración anaerobia: la que utiliza nitrato como aceptor final de electrones. Los nitratos se reducen a nitritos y algunas bacterias reducen los nitritos a productos gaseosos ( N₂ y N₂O). Las enzimas responsables de ambas reducciones se denominan nitrato y nitrito reductasa, respectivamente.

La prueba detecta nitritos en los cultivos con reactivos que originan una coloración roja. La reducción de nitritos hasta gas se detecta por medio de una campanita Durham.

Materiales y reactivos

-Medio de cultivo con nitrato), reactivos para detección de nitritos (soluciones en ácido acético de alfa-naftilamina y ácido sulfanílico) y zinc

Método:

Inocular el medio de cultivo. Incubar a 37 ^oC durante 48 horas

Resultados

1- Observar si existen gases en la campana Durham ( como en la primera de las imágenes adjuntas, Pseudomonas)

2- Añadir 0,5 ml de cada uno de los reactivos para detectar nitritos (Video rectivos ; Video reactivos ). La ausencia de nitritos puede tener un origen doble: no se formaron( quedan nitratos) o se formaron y se redujeron( no uedan nitratos)

- 3-Si no aparece coloración roja (ausencia de nitritos) se añade un poco de zinc(para reducir nitratos) y se observa si aparece color (quedaban nitratos) o permanece incoloro (no quedaban nitratos en el cultiuvo). Video Granalla de Zinc

Nitrato reductasa

Nitrito reductasa

Gases en la campana

+

+

Coloración roja y gases en la campana

+

+

Coloración roja tras la adición de reactivos

+

-

No coloración. No gases. Al zinc, coloración roja

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-

No coloración. No gases. No coloración al añadir zinc*

+

+

*Este caso es resultado de la reducción asimiladora de nitratos. El nitrito originado es reducido a NH₄⁺ que se incorpora en el metabolismo celular, la enzima que interviene es una nitrato reductasa asimiladora diferente de la desasimiladora