Introducir la muestra de orina problema (20 ml) en el embudo de decantación. Agregar 3 gotas de HCl concentrado para acidificar, comprobando que se consigue el pH deseado.  VER FOTOS

Extraer con 50 ml de éter etílico: medir en una probeta 50 ml de éter y agregarlos al embudo. Tapar el embudo y agitar por inversión durante dos minutos. De vez en cuando abrir la llave para dejar escapar los gases que se pueden originar durante la agitación. Finalmente, dejar en reposo para que se separen las fases (la fase orgánica –etérea en nuestro caso-, quedará en la parte superior).   VER FOTOS

Recoger la fase acuosa inferior (fracción B) en el “contenedor de orina” y guardar para continuar posteriormente la extracción.  VER FOTOS

Extraer dos veces (2 x) con 5 ml de solución de bicarbonato:
a) Agregar a la fase orgánica (etérea) contenida en el embudo, 5 ml de solución de bicarbonato sódico y extraer como se indicó en el punto 2.   VER FOTOS
b) Recoger en un tubo graduado 5 ml de la fase acuosa inferior. Agregar otros 5 ml de bicarbonato a la fase orgánica y extraer de nuevo. Recoger la fase acuosa inferior sobre el tubo que contenía los primeros 5 ml. Obtendremos así la fracción ácida fuerte “A”. La fase orgánica seguirá conteniendo los tóxicos ácidos débiles (a) y los neutros (N).   VER FOTOS

Lavar la fase orgánica (a + N) con 5 ml de agua: agregar a la fase etérea (orgánica) 5 ml de agua destilada y extraer como en el punto 2. Recoger 6 ml de la fase inferior y desecharlos.   VER FOTOS

Extraer con 5 ml de NaOH 0,45 N: agregar 5 ml de la solución de NaOH a la fase orgánica y extraer como en el punto 2.   VER FOTOS

Recoger en un tubo de ensayo graduado 4,5 ml de la fase acuosa inferior. Obtendremos así la fracción ácida débil “a” .  VER FOTOS

Filtrar la fase orgánica sobre un filtro de papel en el que previamente hemos colocado sulfato sódico anhidro. Recoger sobre una cápsula de porcelana.   VER FOTOS

Evaporar el éter sobre una placa calefactora (en campana) procurando que no se “reseque” el extracto. Para ello, cuando falten 1-2 ml por evaporar, retirar la cápsula de la placa y ladearla suavemente hasta que finalice la evaporación. Dejar enfriar. Obtendremos así la fracción neutra “N” .   VER FOTOS

Transferir al embudo de decantación la fase acuosa “B” que obtuvimos en la primera extracción (recogida sobre el contenedor de orina). Alcalinizar con 3-4 gotas de hidróxido amónico hasta conseguir un pH aproximado de 9.   VER FOTOS

Extraer con 50 ml de éter etílico siguiendo el proceso habitual. Recoger 5-6 ml de la fase acuosa inferior y desecharla.   VER FOTOS

Lavar con 5 ml de agua. Para ello agregar a la fase orgánica 5 ml de agua y extraer. Recoger 6 ml de la fase acuosa inferior y desecharlos.   VER FOTOS

Extraer con 5 ml de ácido sulfúrico 1 N. Agregar 5 ml de ácido sulfúrico 1 N y extraer como en el paso 2. Recoger sobre un tubo de ensayo graduado de 10 ml 4,5 ml de la fase acuosa inferior (evitando coger fase orgánica). Obtendremos así la fracción básica “B” .   VER FOTOS